There is currently no text in this page. You can search for this page title in other pages, search the related logs, or edit this page.
Stage:1
From Master 2 Recherche Biosciences Végétales
Laboratoire d'accueil : CNRS-UPS UMR 5546
Equipe d'accueil : Réponses adaptatives au froid
Encadrant(e)(s) : Teulieres Chantal (0562193522, teulieres@scsv.ups-tlse.fr)
Contexte et objectifs :
La thématique du groupe est centrée sur la tolérance au froid des végétaux et plus particulièrement de l’Eucalyptus, un arbre à feuilles persistantes sans endodormance. Les facteurs de transcription CBF (C-repeat Binding Factor) sont connus pour jouer un rôle important dans l’acquisition de cette tolérance, via l’induction d’un grand nombre de gènes impliqués dans la protection cellulaire. Les résultats et outils générés ces dernières années conduisent l’équipe d’accueil à orienter ses travaux sur la relation négative observée entre croissance et tolérance aux stress abiotiques. Pour déterminer la nature du lien et les gènes responsables de la régulation, les premiers résultats de la littérature chez Arabidopsis suggèrent que les facteurs CBF pourraient réguler la GA2ox, impliquée dans l’inactivation de gibbérelline et ainsi provoquer une réduction de croissance, via l’accumulation de protéines DELLA.
Chez l’Eucalyptus, l’équipe a généré des plantules surexprimant 2 des 4 gènes isolés. A coté d’une amélioration significative de la tolérance au froid, les lignées in vitro présentent effectivement une perturbation de la croissance et des modifications morphologiques très significatives. Ce projet, qui fait partie du programme européen ANR ERAPG « Frosty » axé sur les gènes CBF d’Arabidopsis et d’Eucalyptus, vise notamment à exploiter des lignées transgéniques pour identifier des gènes et/ou voies métaboliques en lien avec la croissance et contrôlés par les CBF. Pour cet objectif, 3 banques soustractives ont été construites en utilisant une lignée surexprimant le gène EguCBF1a et la lignée contrôle, acclimatée ou non. L’identification des gènes isolés (induits ou réprimés) est en cours.
Le sujet M2R s’inscrit donc dans la poursuite de ces travaux avec l’objectif de comparer l’identité et la régulation de gènes dans la lignée surexprimant le CBF par rapport à la lignée contrôle acclimatée, c'est-à-dire de comparer le régulon CBF avec l’ensemble es gènes régulés au cours de l’acclimatation au froid des plantules in vitro d’Eucalyptus.
Programme :
Hybridations macroarrays : parmi les clones identifiés, les non-redondants et suffisamment représentatifs (>250pb) seront déposés sur filtres nylon. L’hybridation se fera en premier lieu avec les ADNc utilisés pour la construction des banques dans le but de sélectionner les gènes dont l’expression différentielle est confirmée. Ces filtres pourront aussi être hybridés avec des cibles issues d’autres lignées transgéniques disponibles (surexprimant EguCBF1b) ou de lignées ex vitro (transgéniques et sauvages traitées au froid) afin de consolider les résultats.
Analyse fine des profils d’expression en RTqPCR de gènes choisis soit pour leur identité soit pour leur niveau d’expression sur filtres.
En parallèle, si les gènes de GA2ox ou de DELLA ne sont pas identifiés dans le pool de gènes, ils seront recherchés par une démarche ciblée.
Enfin, en fonction de l’avancement des travaux, des expériences de restauration de croissance par addition de gibbérelline seront menées sur les lignées transgéniques in vitro.
L’ensemble des données attendues permettra d’identifier des gènes susceptibles d’être impliqués dans les mécanismes de croissance et de développement associés à l’expression des CBF.