Stage:137

From Master 2 Recherche Biosciences Végétales

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Mécanisme de la régulation de succinoglycane par l’AMPc chez S. meliloti ; recherche d’une interaction entre les protéines ExoR et Smc02178

Laboratoire d'accueil : LIPM INRA CNRS http://www6.toulouse.inra.fr/lipm
Equipe d'accueil : Fonctions symbiotiques, génome et évolution des rhizobia
Encadrant(e)(s) : Jacques Batut jacques.batut@toulouse.inra.fr Anne-Marie Garnerone garneron@toulouse.inra.fr

Nos travaux récents ont mis en évidence un mécanisme original d’autorégulation de l’infection (AOI) impliquant un dialogue moléculaire entre la plante Medicago et sa bactérie symbiotique Sinorhizobium meliloti (Tian et al 2012). Nous avons proposé que la bactérie endosymbiotique module négativement la sensibilité de la racine à l’infection lorsqu’un nombre suffisant de nodosités infectées est atteint. Cette autorégulation est abolie dans des mutants bactériens, notamment le mutant smc02178, affectés dans une cascade de transduction de signal impliquant l’AMPc. Nous cherchons à préciser le mécanisme par lequel le rhizobium module la sensibilité racinaire à sa propre infection et, en particulier, à évaluer le rôle d’exopolysaccharides de faible PM, de type succinoglycane, dans ce processus. Nous avons en effet montré que l’activation de la cascade AMPc bactérienne s’accompagne de la production de succinoglycane, molécule par ailleurs essentielle à l’infection primaire des racines chez Medicago (Gibson et al. 2008). Il est donc possible que le succinoglycane, ou une molécule proche, soit responsable du contrôle négatif de l’infection secondaire.
Les travaux de génétique du M2R précédent ont montré que la protéine périplasmique smc02178 pourrait interagir avec le système régulateur à deux composants exoS/chvI, par ailleurs assez bien caractérisé. Il est en particulier connu que l’activité d’ExoS/ChvI est régulée par un répresseur périplasmique ExoR dont l’abondance est elle-même régulée par protéolyse (Lu et al.2012). Notre hypothèse est que smc02178 interagit avec ExoR dans le périplasme et module son niveau de protéolyse.
Afin de tester cette hypothèse nous proposons au cours de ce stage (i) de tester l’interaction entre ExoR et Smc02178 par un système double-hybrides (ii) de mesurer le niveau de protéolyse d’ExoR in vivo, en présence et absence de smc02178, en utilisant des anticorps anti-ExoR capables de détecter les formes intacte et protéolysée d’ExoR (Lu et al. 2012).

Techniques : microbiologie moléculaire, Western blots, immunoprécipitation

Références (5 max) :
Tian et al. (2012) Plant-activated bacterial receptor adenylate cyclases modulate epidermal infection in the Sinorhizobium meliloti-Medicago symbiosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 109(17):6751-6
Lu et al. (2012) Sinorhizobium meliloti ExoR is the target of periplasmic proteolysis J. Bacteriol 194: 4029.