There is currently no text in this page. You can search for this page title in other pages, search the related logs, or edit this page.
Stage:2
From Master 2 Recherche Biosciences Végétales
Laboratoire d'accueil : CNRS-UPS UMR 5546
Equipe d'accueil : Réponses adaptatives au froid
Encadrant(e)(s) : Marque Christiane (0562193522, marque@scsv.ups-tlse.fr)
1-Contexte et objectifs :
Notre programme de recherche est centré sur les réponses adaptatives au froid de l’Eucalyptus, avec une approche de génomique fonctionnelle. L’équipe s’est particulièrement intéressée à l’étude de la famille de facteurs de transcription CBF (CRT-Binding Factor), considérée comme une composante essentielle de la réponse au froid. Le projet fait partie du programme européen ANR ERAPG « Frosty » axé sur les gènes CBF d’Arabidopsis et d’Eucalyptus.
Pour étudier la voie CBF chez l’Eucalyptus, l’équipe dispose d’outils tels que les lignées d’Eucalyptus transgéniques surexprimant EguCBF1a ou 1b et aussi de lignées cellulaires surexprimant les CBF ou inhibées dans l’expression CBF (RNAi).
Au-delà de l’impact positif de la surexpression des CBF sur la tolérance au gel mais aussi à la déshydratation, les plantes transgéniques caractérisées au stade in vitro présentent des altérations de la croissance et du développement. Les modifications morphologiques observées sont par exemple une réduction de la surface et de l’épaisseur des feuilles, une diminution de la taille des cellules et de la densité de stomates, une augmentation de la densité des glandes à huile ainsi qu’un dépôt de cire sur les 2 faces de la feuille. Certaines de ces modifications phénotypiques ont déjà été observées chez d’autres espèces transgéniques surexprimant des CBF, sans que les acteurs soient encore clairement identifiés au niveau moléculaire. La relation entre voie CBF et voie de biosynthèse d’hormone a seulement été suggérée par des travaux récents chez Arabidopsis.
Le projet M2R vise à vérifier et d’élargir l’analyse phénotypique de 3 lignées transgéniques (EguCBF1a1, EguCBF1b9 et pK7) après leur enracinement et leur passage ex vitro. Il s’agira donc de caractériser ces lignées en mesurant leur tolérance aux stress abiotiques (froid, déshydratation), leur croissance et en évaluant les modifications morphologiques, en comparaison avec les résultats obtenus in vitro. Par ailleurs, des expériences de restauration de croissance par apport de gibbérellines pourront être menées sur ces lignées transgéniques, si elles s’avèrent réduites en taille.
En parallèle et pour compléter l’étude fonctionnelle des CBF, il est nécessaire d’étudier des lignées cellulaires inhibées « CBF-RNAi » pour l’expression d’un (RNAi spécifique) ou des 4 CBF (RNAi consensus) en comparaison avec les lignées surexprimant le CBF « OE-CBF ». Parmi les lignées cellulaires transgéniques déjà disponibles et potentiellement modifiées pour l’expression du CBF, il faudra donc cribler les plus intéressantes.
2-Programme
- Enracinement des lignées in vitro et acclimatation des plantules ex vitro
- Mesure de leur tolérance aux stress abiotiques (gel et déshydratation)
- Mesure de la croissance et évaluation des modifications morphologiques
- Essais de restauration de croissance des plantules par ajout de gibbérelline
- Sélection des lignées cellulaires CBF-RNAi ou OE-CBF par mesure en RTqPCR des transcrits CBF.
L’ensemble de ces résultats vise à confirmer l’impact de la surexpression des CBF sur la tolérance et le développement des plantules d’Eucalyptus ex vitro mais aussi de sélectionner des lignées cellulaires pour de nouvelles études fonctionnelles des CBF.